Приложение на молекулярно-биологичен метод за идентифициране на Vibrio parahaemolyticus
Ключови думи :
Vibrio parahaemolyticus, живи двучерупчести мекотели, PCRАбстракт
Vibrio parahaemolyticus се изолира често от морски храни и има важна роля в етиологията
на хранителните заболявания, протичащи с гастроентерит при хората. Значителна част от
патогенните щамове продуцират термостабилен директен хемолизин (TDH) и TDH-свързан
хемолизин (TRH), които са кодирани съответно от tdh- и trh-гени. В това проучване са изследвани 130 съмнителни за Vibrio parahaemolyticus изолати, получени от проби живи двучерупчести мекотели (M. galloprovincialis). Потвърждаването им е извършено с културални методи
и полимеразно-верижна реакция (PCR). Културалните методи включват ISO 21872-1:2007 и
биохимично потвърждаване с API 20E. PCR методът е приложен с амплифициране на видовоспецифичният ToxR-ген и на tdh- и trh-гените за патогенност. От 130 изследвани изолати в 34
(33 %) и 12 (28 %) са регистрирани положителни резултати за V. parahaemolyticus, съответно
чрез биохимични и молекулярно-биологични методи. От 12-те проби, положителни за ToxRген, нито една не е положителна по отношение на патогенните гени (tdh и trh). При сравнение
с техниката на биохимичните тестове използваният PCR протокол е по-бърз и подходящ за
рутинна лабораторна диагностика на V. parahaemolyticus в двучерупчестите мекотели.
Литература (библиография)
Baross, J., & Liston, J. (1968). Isolation of Vibrio parahaemolyticus from the Northwest Pacific. Nature, 217(5135), 1263.
Baross, J., & Liston, J. (1968). Isolation of Vibrio parahaemolyticus from the Northwest Pacific. Nature, 217 (5135), 1263.
Bej, A. K., Patterson, D. P., Brasher, C. W., Vickery, M. C., Jones, D. D., & Kaysner, C. A. (1999). Detection of total and hemolysin-producing Vibrio parahaemolyticus in shellfish using multiplex PCR amplification of tl, tdh and trh. Journal of microbiological methods, 36(3), 215-225.
Croci, L., Serratore, P., Cozzi, L., Stacchini, A., Milandri, S., Suffredini, E., & Toti, L. (2001). Detection of Vibrionaceae in mussels and in their seawater growing area. Letters in Applied Microbiology, 32(1), 57-61.
Dileep, V., Kumar, H. S., Kumar, Y., Nishibuchi, M., Karunasagar, I., & Karunasagar, I. (2003). Application of polymerase chain reaction for detection of Vibrio parahaemolyticus associated with tropical seafoods and coastal environment. Letters in Applied Microbiology, 36(6), 423-427.
Fabbro, C., Cataletto, B., & Del Negro, P. (2010). Detection of pathogenic Vibrio parahaemolyticus through biochemical and molecular-based methodologies in coastal waters of the Gulf of Trieste (North Adriatic Sea). FEMS microbiology letters, 307(2), 158-164.
Fujino, T., D. Okuno, A. Nakada, K. Aoyama, M. Fukai, T. Ueho. (1951). On the bacteriological examination of shirasu food poisoning. J. Jpn. Assoc. Infect. Disease, 35, 11-12.
Hervio-Heath, D., Colwell, R. R., Derrien, A., Robert-Pillot, A., Fournier, J. M., & Pommepuy, M. (2002). Occurrence of pathogenic vibrios in coastal areas of France. Journal of applied microbiology, 92(6), 1123-1135.
Kim, Y. B., Okuda, J. U. N., Matsumoto, C., Takahashi, N., Hashimoto, S., & Nishibuchi, M. (1999). Identification of Vibrio parahaemolyticus strains at the species level by PCR targeted to the toxR gene. Journal of Clinical Microbiology, 37(4), 1173-1177.
Martinez-Urtaza, J., Lozano-Leon, A., DePaola, A., Ishibashi, M., Shimada, K., Nishibuchi, M., & Liebana, E. (2004). Characterization of pathogenic Vibrio parahaemolyticus isolates from clinical sources in Spain and comparison with Asian and North American pandemic isolates. Journal of Clinical Microbiology, 42(10), 4672-4678.
Martinez-Urtaza, J., Lozano-Leon, A., Varela-Pet, J., Trinanes, J., Pazos, Y., & Garcia-Martin, O. (2008). Environmental determinants of the occurrence and distribution of Vibrio parahaemolyticus in the rias of Galicia, Spain. Appl. Environ. Microbiol., 74(1), 265-274.
Nelapati, S., & Krishnaiah, N. (2010). Detection of total and pathogenic Vibrio parahaemolyticus by Polymerase chain reaction using toxR, tdh and trh genes. Veterinary World, 3(6), 268-271.
O’Hara, C. M., Sowers, E. G., Bopp, C. A., Duda, S. B., & Strockbine, N. A. (2003). Accuracy of six commercially available systems for identification of members of the family Vibrionaceae. Journal of clinical microbiology, 41(12), 5654-5659.
Ottaviani, D., Masini, L., & Bacchiocchi, S. (2003). A biochemical protocol for the isolation and identification of current species of Vibrio in seafood. Journal of applied microbiology, 95(6), 1277-1284.
Ottaviani, D., Santarelli, S., Bacchiocchi, S., Masini, L., Ghittino, C., & Bacchiocchi, I. (2005). Presence of pathogenic Vibrio parahaemolyticus strains in mussels from the Adriatic Sea, Italy. Food Microbiology, 22(6), 585-590.
Topić Popović, N., Čož-Rakovac, R., & StrunjakPerović, I. (2007). Commercial phenotypic tests (API 20E) in diagnosis of fish bacteria. Veterinarni Medicina. 52 (2), 49-53.
Pujalte, M. J., Ortigosa, M., Macián, M. C., & Garay, E. (1999). Aerobic and facultative anaerobic heterotrophic bacteria associated to Mediterranean oysters and seawater. International Microbiology, 2(4), 259-266.
Rojas, M. V. R., Matté, M. H., Dropa, M., Silva, M. L. D., & Matté, G. R. (2011). Characterization of Vibrio parahaemolyticus isolated from oysters and mussels in São Paulo, Brazil. Revista do Instituto de Medicina Tropical de São Paulo, 53(4), 201-205.
Zulkifli, Y., Alitheen, N. B., Son, R., Yeap, S. K., Lesley, M. B., & Raha, A. R. (2009). Identification of Vibrio parahaemolyticus isolates by PCR targeted to the toxR gene and detection of virulence genes. International Food Research Journal, 16, 289-296.
Food and Drug Administration (FDA) (2005). Centre for Food safety and Applied Nutrition. Quantitative risk assessment on the public health impact of pathogenic Vibrio parahaemolyticus in raw oysters. Available at: http://www.cfsan.fda.gov/acrobat/vpra.pdf. Accessed 15th July 2010.
International Organization for Standardization. (2007). ISO/TS 21872-1: 2007: Microbiology of food and animal feeding stuffs–Horizontal method for the detection of potentially enteropathogenic Vibrio spp. Part 1: Detection of Vibrio parahaemolyticus and Vibrio cholera.
Файлове за сваляне
Публикуван
Брой
Раздел (Секция)
Категории
Лиценз
Авторски права (c) 2019 Животновъдни науки
Публикация с Creative Commons Attribution-NonCommercial-ShareAlike 4.0 International License.
